【原理】

?????? 禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus ,AIV)引起的一種禽類急性高度致病性傳染病。本病以急性敗血性死亡到無(wú)癥狀帶毒等多種病癥為特點(diǎn)，禽類感染后體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生特異性抗體。檢測(cè)特異性禽流感病毒抗體可作為該病疫苗免疫狀況及該病輔助檢測(cè)指標(biāo)。

?????? 本試劑盒采用ELISA方法檢測(cè)雞血清中的特異性抗禽流感病毒抗體。本試劑靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1．洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2．樣本稀釋???用樣本稀釋液(5號(hào)液)將待檢血清樣本按1：100稀釋，如取5ul樣本與495ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽(yáng)性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。

3．加樣反應(yīng)???每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔(分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4．加酶反應(yīng)???除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物(1號(hào)液) 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5．顯色反應(yīng)???加底物液(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號(hào)液)1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

???? 陰性對(duì)照呈無(wú)色或淺黃色，陽(yáng)性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。

???? 以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對(duì)照A值平均值的2.1倍者判為陽(yáng)性。如陰性對(duì)照A值的平均值低于0.08時(shí)按0.08計(jì)算。

【注意事項(xiàng)】

1.試劑盒于2-8℃保存，有效期6個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗(yàn)樣本應(yīng)為無(wú)染菌、無(wú)血脂、無(wú)溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

6. 37℃孵育時(shí)，建議使用水浴箱。如無(wú)條件，可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。

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什么是禽流感？

中文名稱：禽流感英文名稱：avian influenza;AI

其他名稱：真性雞瘟定義：由禽流感病毒(AIV)所引起的一種主要流行于雞群中的烈性傳染病。高致病力毒株可致禽類突發(fā)死亡，是國(guó)際獸疫局規(guī)定的A類疫病，也能感染人。

應(yīng)用學(xué)科：免疫學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；畜牧免疫（二級(jí)學(xué)科）

禽流感是禽流行性感冒的簡(jiǎn)稱，它是一種由甲型流感病毒的一種亞型（也稱禽流感病毒）引起的傳染性疾病，被國(guó)際獸疫局定為甲類傳染病，又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。